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MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒正确操作步骤!

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒正确操作步骤!

 

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。

噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。

保存条件:
4℃或-20℃保存,MTT需避光保存,一年有效;MTT配制成溶液后需-20℃避光保存;Formazan溶解液也可以室温保存。

注意事项:
   1、由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
   2、 MTT溶剂在低温情况下会凝固,使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
   3、 MTT配制成溶液后为黄色,需避光保存,长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时,请勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
   4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
   
     

信帆生物拥有一支在试剂研发、抗体研究、生产及质量管理方面具有丰富经验的高素质人才队伍。环境优美、整洁,从细胞培养、蛋白纯化、疫苗配制到小容量注射剂、分装及锅炉、空调、制水全套生产线。检验仪器均采用国内外先进设备。先进的厂房设施、精良的仪器设备,从而确保了产品的质量和检测的快速、准确、方便,在同行业中一直名列前茅。

 

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