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ATP生物发光检测试剂盒适用范围,操作超简单!

ATP生物发光检测试剂盒适用范围,操作超简单!

 

简介:

利用萤火虫荧光素酶催化底物荧光素的转化,高效利用ATP的能量发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比的原理进行ATP的生物发光检测。该产品可用于快速、定量测定液体样品中或细胞或组织内的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。产品中的Lysis Buffer能够有效裂解细菌、细胞以及微生物样品,充分释放ATP,适用于多种样本来源的ATP检测。Luciferase/Luciferin substrate采用优化的酶反应体系,产生的荧光在一分钟内保持稳定。该产品检测灵敏度达到 10-16 mol,检测范围在 10-11至 10-16 mol之间,可用于微量ATP检测。

 

适用范围:

可用于检测多种来源样品中细菌、细胞以及微生物的 ATP,及微量 ATP 检测。

 

样品裂解:

1.贴壁细胞的裂解:
吸除培养液,加入足够覆盖细胞的 Lysis Buffer(如 24 孔细胞培养板加入 150ul Lysis Buffer),可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使 Lysis Buffer 充分接触并裂解细胞,室温静置 5-10min 后,吸取上清进行检测。

2.悬浮细菌、细胞的裂解:
转移悬浮液到 1.5ml 离心管中,离心沉淀细胞,弃尽上清,按照 24 孔板每孔的细胞量对应 150μl Lysis Buffer 的比例加入 Lysis Buffer,移液器反复吹打几次,室温静置 5-10分钟后,吸取上清进行检测。对于悬浮样品的裂解也可以将样品充分混匀后直接吸取适量体积加入 Lysis Buffer,移液器反复吹打几次,室温静置 5-10 分钟后进行检测。样品体积不超过 Lysis Buffer 的1/3。 对植物、

3.动物组织样品的裂解:
取适量组织样品,加入适当比例的 Lysis Buffer(如 20mg 植物组织加入 500ul Lysis Buffer)后用玻璃匀浆器或研钵进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解,离心后取上清进行检测。

其它来源的 ATP:
对于其它有效方法如三lv乙酸法等提取的 ATP 样品,或游离 ATP 的检测,可直接稀释
到检测范围后用配制好的 Luciferase/Luciferin Reagent 进行检测。

 

试剂盒优点多多:

1. 方便:反应试剂容易配制。

2. 检测试剂产生的荧光稳定性高,不需要快速混匀操作。

3. 快速:样品裂解在 5-10 分钟内完成,加入稀释后的 Luciferase/Luciferin substratet即可检测。

4. 灵敏:可检测少至 10-16 mol ATP。

 

注意事项:

1、 操作过程中需注意避免 ATP 污染,尤其是检测微量 ATP 时,配制试剂时需用无菌水,使用的吸头需灭菌,操作时戴一次性手套。

2、 Luciferase 活性可被多种去污剂抑制,其zui'佳 pH 为 7-8 之间,本试剂盒提供的裂解液用量不超过 10ul 时对 Luciferase/Luciferin Reagent 发光值没有影响,但是如果需要采用其它裂解方法提取 ATP 时,需考虑裂解液成分对 luciferase 活性的影响。

3、 配制好的 Luciferase/Luciferin Reagent 在室温放置 6 小时,4℃放置 7 天内发光值下降在 10%之内,因此检测微量 ATP 时,为了降低背景发光值,可将 Luciferase/Luciferin Reagent 室温放置 6 小时内或 4℃放置 7 天内以充分消耗 ATP

 

 

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