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辣根过氧化物酶 HRP主要用途是什么!

辣根过氧化物酶 HRP主要用途是什么!

 

说明:POD是一种具有氧化还原酶性质的血红素蛋白。用于生化研究,是酶标记法所用的一种主要酶。也用于生物液体中 葡萄糖和半乳糖的测定。

 

溶解性 10 mg/mL in water
来源 From horseradish
CAS 9003-99-0
储存条件 -20℃
酶活/效价 233-300units/mg.solid
外观(性状) 褐色结晶性冻干粉状 

 

HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,中性糖和氨基糖约占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基,该辅基在403nm波长处有大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比,也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示HRP制剂的真正纯度,而且RZ值高的HRP制剂,并不意味着酶活性也高。

 

但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1%(W/V)酶溶液吸光度为22.5,浓度为227umol/L]。HRP干燥贮存于–20oC可保持稳定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存,可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定,用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0%甲醛水溶液固定做冷冻切片,均不能使其活性改变。

 

qing化物或硫化物在10–5~10–6mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol/L浓度时抑制HRP;HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。

 

HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用为广泛的标记用酶,主要是因为其一方面易于提取,价格相对低廉;另一方面性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体偶联后,活性很少受损失。

 

辣根过氧化物酶 HRP主要用途是什么!

 

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