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大鼠外周血淋巴细胞分离液适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞

大鼠外周血淋巴细胞分离液适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞

 

本分离液为Ficoll、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲an的混合液。抗凝外周血可在分离液中分层。离心时,在Ficoll、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降;此时,淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层,红细胞污染可忽略不计。大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。 其他人及动物多种比重细胞分离液,因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。

 

 

适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞,无菌条件下所分离的淋巴细胞可用于细胞培养等。本品仅供科研使用。

密度:1.0830±0.0001g/ml

 

本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 

操作步骤:

 

1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液(当稀释后血液体积小于3mL时,加入3mL分离液;大于等于3mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,zui佳的分离条件需摸索,离心转速zui大不超过1200g)。

4. 离心后将出现明显的分层:zui上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中, 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。

6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

7. 重复步骤6

8. 弃上清,细胞重悬备用。

 

注意事项:

A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 

C. 血液样本zui好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。

D. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。

 

大鼠外周血淋巴细胞分离液适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞

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